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水蛭素提取的方法研究

文章主题:昆虫养殖  文章来源:农业百科  发布时间:2017-01-31

这方面的实验与应用,多见于国外报道。目前国内采用不多。下面我们了解一下水蛭素提取方法。

1.提取水蛭素的有效部位

水蛭素主要产生于水蛭的唾液里,当水蛭吸血时,将其分泌出来,阻止血液凝固。因而,实践表明,提取水蛭素的最佳部位在头部。i.p.baskova在比较了从水蛭头部、去头后的体部及整体水蛭中提取的水蛭素后发现,从头部得到的水蛭素活性最强,从整体得到的活性只有头部的一部分,而从去头后的体部得到的是伪水蛭素,其化学性与水蛭素相同,但无抗凝活性。

水蛭素提取

2.提取水蛭素的方法

(1)用能与水混溶的有机溶剂提取:从水蛭头部提取:即将水蛭头部剪下,切成碎片,以其10倍体积的40%丙酮一水提取2次,每次30min。合并提取液,再加1/2体积的809《丙酮一水,加冰醋酸调至ph4.3—4.5,离心除去沉淀,上清液用氨水调至ph6.0,在40℃下,减压浓缩至原体积的l/10。再用10%三氯醋酸调至ph1.8。最后以10倍体积的冷丙酮(—5℃一0℃)将粗水蛭素沉淀析出。

从水蛭整体中提取:即将80%的冷丙酮加到磨碎的水蛭粉中,搅拌10min后,加氯化钠(0.2—0.5mol几)和三氯醋酸(0.1—0.4mol/l),使ph值达到2.5—3.5,搅拌30—60min,倾出上清液,沉渣再用1/3体积的上述80%丙酮提取1次。合并2次提取液,加入2倍体积的冷丙酮(—10~c),沉淀析出粗水蛭素。

(2)用水提取:

将水蛭磨成细粉,加入0.5mol几氯化钠液,室温搅拌30—60min,调成ph2.0—2.5后,升温至70'c,搅拌15min离心去渣。上清液调至ph6.5—7.0,加入l.5倍体积的乙醇,去沉淀。上清液在30℃一40℃,真空浓缩至原体积的1/20左右。向浓缩液中加入等体积的丙酮,去沉淀,再加入4倍体积的冷丙酮(—5℃一0℃),将粗水蛭素沉淀析出。水蛭素的分离,多用离子交换、凝胶层析和等聚焦等方法。如作进一步研究,可以分离提到纯晶。

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