如何进行葡萄无病毒组培快繁的工厂化生产

如何进行葡萄无病毒组培快繁的工厂化生产

用组织培养法繁殖葡萄,可达到优良葡萄快速育苗的目的,以满足生产需要。同时也是工厂化育苗和脱毒苗木快速繁殖的重要手段,并能常年进行,缩短了苗木繁殖周期,加快新品种的推广应用。

葡萄无病毒组培快繁的工厂化生产

(1)试管苗的初代培养

植物组织培养是无菌地培养植物的技术,因此,离体进行葡萄试管繁殖,脱除病毒,胚胎花药和子房培养,细胞和原生质培养,离体保存等,都必须使用无菌材料。葡萄组织初代培养,繁殖材料多取自大田,常带有大量细菌和霉菌,必须进行消毒方可获得无菌材料。

材料采集在组培前3天的晴天上午,取带腋芽的葡萄半木质嫩茎,剪取后立即拿入室内,先用自来水反复冲洗,除去病虫枝、伤残,减除大叶片,装入广口瓶进行消毒。

用无菌操作技术,倒入无菌水浸泡和冲洗;倒去无菌水,加入0.1%升汞浸泡材料,并剧烈摇动6~9分钟,剪去受伤端面,剪成单芽茎段,接入培养基中。每瓶一段,正插入内。标号后放到培养室培养,一周后检查,如未污染,基本上不会再污染。

(2)试管苗的继代繁殖

对初代培养合格或引进的试管苗,一般采用ms、b5、gs等培养基。具体做法如下:

①穿好工作服,戴上工作帽,用洁净的水洗手,再用75%的酒精棉球擦手消毒;②取无菌原种苗瓶放于超净台,用70%酒精棉球仔细擦拭包头纸及苗瓶外体,并解开包头纸捆扎线绳;

③将弯剪刀、枪状镊子浸入75%酒精中,用时取出在火焰上烧15~30秒,晾凉备用;

④将无菌原种苗瓶的包头纸连棉塞一同拔下,放在超净台一旁,瓶口在火焰上烧5~10秒,用冷却的剪刀将瓶内小苗剪成单芽茎段,下端稍长,上端较短,但剪口距芽至少0.5厘米以上。母株基部要留一个芽,使其再发。剪下的单芽茎段,用无菌镊子逐个夹出,放入新的培养基瓶内,并使叶子和芽露出培养基。150毫升三角瓶插5个左右茎段,插完后将瓶口在火焰上转动烧一圈,旋好棉塞和包上包头纸,用绳扎好,注明品种名称和时间等。如此反复地接好所有苗子,并放到培养室。一般每月转接增殖3次。

(3)试管苗的培养

将接种后的培养苗瓶,放在培养室的架上,培养室昼夜温度保持在22~28℃,新转接的苗瓶应放在培养架上层,上层温度略高易于生根。相对湿度以70%为宜,光照2000~3000勒克斯。

(4)移栽

移栽多在冬季或春季进行。

①光培炼苗。培养室培养的试管苗生长达瓶口、有3~4枚正常叶片时,根系生长良好,连同培养瓶转入温室或大棚内,逐步去掉瓶塞,放在干净的温室中,2万~4万勒克斯的自然光下炼苗5~7天。当瓶口长出油亮的叶片、幼茎变淡红色时即可出瓶。

②沙培炼苗。最好备有下铺电热线并能调节温度的沙床,使床温维持在25℃左右,以0.6厘米间距布置电热线,其上铺垫2厘米的土,压平,再铺8~10厘米的干净细河沙,湿度在12%左右,即手捏成团落地能散。

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